讓你從零開始搞懂PCR實驗室規(guī)劃設(shè)計

之前有小伙伴問小編如何建一個標準的PCR實驗室?PCR實驗室如何設(shè)計規(guī)劃才堪稱專業(yè)?PCR實驗室管理又有哪些注意要點?今天小編就幫你剖析PCR實驗室規(guī)劃設(shè)計標準，讓你從0開始搞懂PCR實驗室規(guī)劃設(shè)計。

PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR (Polymerase Chain Reaction)，中文翻譯為聚合酶鏈式反應(yīng)，取名效法“原子核裂變鏈式反應(yīng)” 。其反應(yīng)效果也是名符其實，通過一對預(yù)先設(shè)計的引物、耐熱的DNA聚合酶以及反應(yīng)原料，即可在體外模擬DNA復(fù)制的過程：

→首先將待擴增DNA模板加熱變性解鏈;

→隨之冷卻至某一溫度時，引物與待擴增模板序列發(fā)生退火結(jié)合;

→再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。

接下來介紹一下標準的PCR 實驗室分為四個區(qū)域，分別為：

1.試劑配制區(qū);

2.樣品處理區(qū);

3.核酸擴增區(qū);

4.產(chǎn)物分析區(qū);

設(shè)計要點

PCR實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實驗，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個實驗過程，若實驗工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過程。

一、分散形式PCR實驗室

所謂分散形式PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠，呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實驗室，由于各個實驗之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求。

二、組合形式PCR實驗室

所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置，組成獨立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式PCR實驗室，由于各個實驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間，以減少室內(nèi)外空氣交換。
基因擴增實驗室又稱PCR實驗室，其特點是能將微量的DNA大幅增加，廣泛應(yīng)用于生物學各個領(lǐng)域。
PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向原則，即只能從試劑準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動。

基本要求：
1、各區(qū)域必須是相互獨立的；
2、各區(qū)域的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的；
3、各區(qū)完全獨立，緩沖間可有可無。如為一個區(qū)套一個區(qū)的模式，區(qū)間不能直通，必須有緩沖間，保證兩個區(qū)域間始終處于隔離狀態(tài)；
試劑準備區(qū)：擴增試劑的配制，分裝和保存，本區(qū)氣壓應(yīng)保持微正壓。主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器、紫外燈。
標本制備區(qū)：實驗室樣品的混樣和測試樣品的制備。工作區(qū)域為負壓或減壓，安裝排風系統(tǒng)。主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、紫外燈。
擴增區(qū)：PCR擴增反應(yīng)體系的配制和模板的加入，核酸擴增。工作區(qū)域為負壓或減壓，安裝排風系統(tǒng)。主要設(shè)備有核酸擴增設(shè)備、冰箱、潔凈工作臺、離心機、加樣器、紫外燈。
擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的測定。工作區(qū)為負壓，安裝排風系統(tǒng)。使用儀器有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
PCR實驗室規(guī)劃圖