1微生物實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)備的質(zhì)控要求

(1）孵箱：根據(jù)需要設(shè)置溫度，可調(diào)溫度范圍應(yīng)由室溫至60℃。孵箱溫度允許的波動(dòng)幅度為設(shè)置溫度±1℃，如一般細(xì)菌培養(yǎng)，孵箱溫度應(yīng)為35℃±1℃。應(yīng)每天記錄孵箱溫度，定期加水，每月清潔內(nèi)壁和架子。
（2）冰箱和低溫冰箱：普通冰箱允許溫度為4℃±2℃，每天記錄溫度，并定期清潔。盡量減少冰箱開啟次數(shù)，減少溫度的波動(dòng)。低溫冰箱控制溫度－20℃±5℃，每天觀察溫度并記錄，每隔3個(gè)月除霜1次。一旦溫度失控，及時(shí)調(diào)整。

（3）水浴箱：根據(jù)需要設(shè)置溫度，允許的溫度波動(dòng)幅度為0.5℃，每日檢查水位，記錄溫度。每月擦拭箱體內(nèi)部并換水。

（4）高壓滅菌器：控制溫度121℃，每次使用前觀察并調(diào)整水位，記錄使用時(shí)間、溫度或壓力。每周用嗜熱芽孢桿菌檢測(cè)滅菌效果，每月清理內(nèi)部及換水，并定期檢測(cè)密封圈的密封效果。

（5）二氧化碳培養(yǎng)設(shè)備：常用的有二氧化碳箱和蠟燭罐，要求二氧化碳濃度為5％～10％，箱內(nèi)或罐內(nèi)保持濕度，并用淋病奈瑟菌作培養(yǎng)效果監(jiān)測(cè)。

（6）厭氧培養(yǎng)設(shè)備：主要有厭氧箱、厭氧罐、厭氧袋?；旌蠚怏w組分要求二氧化碳10％、氫氣10％和氮?dú)?0％。厭氧箱與厭氧罐內(nèi)部要每周清潔，定期更換催化劑。每次使用培養(yǎng)設(shè)備均應(yīng)用美藍(lán)指示劑或銅綠假單胞菌檢測(cè)厭氧效果。
（7）天平：保持刀刃光滑而鋒利、稱盤清潔，并定期校正。

（8）pH計(jì)：要求誤差不超過0.02，并定期校正。

（9）顯微鏡：最常用的是光學(xué)顯微鏡，應(yīng)注意保護(hù)油鏡。每次使用后應(yīng)用擦鏡紙擦去油鏡頭上的鏡油。每天工作結(jié)束后，應(yīng)用含少量（或酒精）的擦鏡紙擦拭油鏡，再用潔凈擦鏡紙擦干。另外，微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室還用到暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡等，均應(yīng)按規(guī)程清潔和保養(yǎng)。

（10）玻璃器皿：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室所用試管、吸管、平皿等應(yīng)潔凈無菌，不殘留酸堿。

（11）接種器具：分為接種針和接種環(huán)兩種。應(yīng)選用傳熱散熱快、耐用和不生銹的材料，早先使用的白金絲由于價(jià)格昂貴，目前多用比較經(jīng)濟(jì)的鎳鉻絲代替。一般要求接種環(huán)長(zhǎng)5～8cm、直徑2～4mm，定量接種環(huán)要定期校正其容量，接種針長(zhǎng)5～8cm。

微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)備控制標(biāo)準(zhǔn)保養(yǎng)及監(jiān)測(cè)
高壓滅菌器溫度≥121℃每次用前換水；每月清潔1次。
孵育箱溫度35℃±1℃每天記錄溫度；每月清潔內(nèi)壁和隔板。
水浴箱溫度37 ℃±0.5℃每天記錄溫度；每月擦內(nèi)壁和換水。
冰箱溫度4℃±2℃每天記錄溫度；保持清潔并定期除霜。
低溫冰箱溫度－20℃±5℃每天記錄溫度；保持清潔并定期除霜。
二氧化碳培養(yǎng)箱:二氧化碳5％～10％,每天記錄溫度；定期換水；用淋病奈瑟菌監(jiān)測(cè)效果。
厭氧培養(yǎng)箱:二氧化碳10％、氫氣10％、氮?dú)?0％,每次使用時(shí)用厭氧指示劑監(jiān)測(cè)效果。
微生物標(biāo)本采集、運(yùn)送與處理原則
標(biāo)本的正確采集、運(yùn)送與處理對(duì)于細(xì)菌的培養(yǎng)、鑒定，有著十分密切的關(guān)系。

一、標(biāo)本采集
（1）送檢申請(qǐng)單必須惟一標(biāo)識(shí)，并注樣品名稱、型號(hào)、年月、性狀、標(biāo)本來源、采集時(shí)間、檢驗(yàn)?zāi)康募疤砑游锸褂们闆r等，以便實(shí)驗(yàn)室能針對(duì)該標(biāo)本選用相應(yīng)培養(yǎng)基和適宜培養(yǎng)環(huán)境，有利于對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的綜合評(píng)估。
（2）為避免漏檢，確保病原體的檢出，應(yīng)盡量在抗菌藥劑使用前采集標(biāo)本。
（3）標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，減少或避免機(jī)體正常菌群及其他雜菌污染。
（4）以棉拭子采集標(biāo)本，如拭子，應(yīng)插入運(yùn)送培養(yǎng)基送檢。
（5）混有正常菌群的標(biāo)本，如拭子，不可置肉湯培養(yǎng)基內(nèi)送檢。
（6）盛標(biāo)本容器須經(jīng)滅菌處理，但不得使用消毒劑。
（7）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定各種送檢標(biāo)本的采集、運(yùn)送、保存等正確方法和注意事項(xiàng)，并應(yīng)向取樣者詳細(xì)介紹如何正確留取和送檢標(biāo)本。

二、標(biāo)本運(yùn)送
標(biāo)本采集后應(yīng)立即送至微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本采集后在室溫下超過2h未送達(dá)實(shí)驗(yàn)室者可視為不合格標(biāo)本。生產(chǎn)線邊檢驗(yàn)可提高病原菌檢出率，送檢標(biāo)本必須與檢驗(yàn)申請(qǐng)單有相同的惟一標(biāo)識(shí)。

三、標(biāo)本驗(yàn)收
實(shí)驗(yàn)室只能接收和處理合格的檢驗(yàn)標(biāo)本，因此應(yīng)制定不合格標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)；對(duì)不合格標(biāo)本應(yīng)注明原因，退回，并做記錄。
四、標(biāo)本處理
（1）實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后，應(yīng)立即根據(jù)標(biāo)類型及檢驗(yàn)?zāi)康?，選擇合適的培養(yǎng)基接種。

（2）混有正常菌群的標(biāo)本，應(yīng)作定量細(xì)菌培養(yǎng)。不能精確定量或常規(guī)定量操作較困難的標(biāo)本，分離出致病菌及條件致病菌為優(yōu)勢(shì)菌時(shí)，應(yīng)作細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)，同時(shí)注明細(xì)菌量化指標(biāo)。

（3）對(duì)已用抗菌藥物治療的標(biāo)本，可在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)以中和藥物對(duì)細(xì)菌的抑制作用。
微生物檢驗(yàn)標(biāo)本的采集
樣品在使用抗生素前，將標(biāo)本采集在無菌容器內(nèi)，立即送到檢驗(yàn)科細(xì)菌室，特殊檢驗(yàn)應(yīng)先與細(xì)菌室聯(lián)系，再按要求采集標(biāo)本，并立即送檢。

（一）樣品的采集：
1.憑檢驗(yàn)申請(qǐng)單到檢驗(yàn)科領(lǐng)取血培養(yǎng)瓶。
2.采取樣品部位和血培養(yǎng)瓶口應(yīng)嚴(yán)格消毒。
3.通常一般至少作三次血培養(yǎng)，在抗菌藥已實(shí)施者，更應(yīng)增加培養(yǎng)次數(shù)，懷疑特定菌種一般應(yīng)一日作三次培養(yǎng)，必要時(shí)需追加次數(shù)。
4.應(yīng)在生產(chǎn)高峰時(shí)采集。
5.對(duì)疑為細(xì)菌性污染的產(chǎn)品，嚴(yán)格消毒后抽取2～3 ml作增菌培養(yǎng)。
6.每次采樣量5-10ml，培養(yǎng)基與樣品之比以10∶1為宜，以稀釋樣品中的菌物質(zhì)。
7.采樣過程應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，避免污染。

微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基質(zhì)量控制
一、配制時(shí)的質(zhì)量控制
（1）容器：配制和分裝培養(yǎng)基的燒瓶、平皿或試管等器材應(yīng)為中性，無酸、堿抑制物殘留，平皿底部要平，以免瓊脂厚薄不一，影響藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

（2）成分來源：各種成分來源可靠，不含對(duì)目的菌生長(zhǎng)有抑制的物質(zhì)。特殊要求的培養(yǎng)基，如葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)（O／F 試驗(yàn)），除加入葡萄糖外，不能含有其他糖類，指示劑不能用乙醇溶液，避免O／F試驗(yàn)的假陽性。培養(yǎng)基配制用水應(yīng)是蒸餾水。

（3）pH值調(diào)整：根據(jù)培養(yǎng)基的不同要求調(diào)整pH 值，控制在要求范圍的±0.2之內(nèi)。應(yīng)當(dāng)注意，培養(yǎng)基在高壓滅菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矯正時(shí)應(yīng)比實(shí)際需要p H值高0.1～0.2。

（4）滅菌：根據(jù)培養(yǎng)基所含成分及配制數(shù)量的不同，選擇不同的滅菌方式，既要達(dá)到滅菌效果，又不破壞培養(yǎng)基成分。一般對(duì)穩(wěn)定的培養(yǎng)基，如MH瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊脂可用高壓滅菌，即121℃15min ；而含糖的培養(yǎng)基則以108℃滅菌為好，以防止糖類破壞。不耐高熱的物質(zhì)如血清、牛乳等，可采用間隙滅菌法滅菌。

（5）分裝：根據(jù)使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養(yǎng)基所用的平皿、試管要求清潔，不殘留酸堿；制備平板培養(yǎng)基時(shí)，操作臺(tái)要水平，以避免瓊脂平板厚薄不一，同時(shí)確保無菌操作。

二、配制后質(zhì)量控制
（1）培養(yǎng)基外觀情況：包括顏色、透明度、有無沉淀和凝固。如發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面有裂紋或與培養(yǎng)皿的邊緣分離，說明培養(yǎng)基有脫水現(xiàn)象，必須丟棄。

（2）無菌試驗(yàn)：每一批配好的培養(yǎng)基均須進(jìn)行無菌試驗(yàn)。先滅菌后分裝的培養(yǎng)基，可采用抽樣方法試驗(yàn)，少于100個(gè)樣本通常選取5％～10％的量，如果配制大量培養(yǎng)基，則任意選取10個(gè)培養(yǎng)基；無菌分裝培養(yǎng)基則需全部做無菌試驗(yàn)。樣本在35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養(yǎng)，如培養(yǎng)基含有血液，則需再置于室溫1天，以檢查嗜冷菌。選擇性培養(yǎng)基因含有抑制物質(zhì)，能抑制許多微生物，因此，可加入10倍量的無菌液體培養(yǎng)基，稀釋抑制物質(zhì)，以利于檢出污染菌。即使做過無菌試驗(yàn)，接種時(shí)，也要檢查每個(gè)平板上的可見菌落。

（3）性能測(cè)試：每一批新制或新購的培養(yǎng)基，使用前均須取已知性質(zhì)的庫存菌種進(jìn)行性能測(cè)試。培養(yǎng)基按目的不同可分為增菌培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。

①增菌培養(yǎng)基：接種少量難以生長(zhǎng)的細(xì)菌，在一定時(shí)間內(nèi)觀察增菌情況，細(xì)菌能生長(zhǎng)的最小接種濃度越小，說明增菌培養(yǎng)基性能愈好。

②分離培養(yǎng)基：要求目的菌生長(zhǎng)良好，非目的菌被抑制。一般要求生長(zhǎng)的目的菌接種量不可過多，較好的方法是將測(cè)試菌調(diào)成0．5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，再?.001ml的標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)涂劃在培養(yǎng)基上，觀察菌落生長(zhǎng)。
③鑒定培養(yǎng)基：應(yīng)選擇具有典型特征的菌株作性能試驗(yàn)。如三糖鐵瓊脂，須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌3種菌分別接種3支培養(yǎng)基，若反應(yīng)結(jié)果為斜面產(chǎn)酸／高層產(chǎn)酸、硫化氫陽性，斜面產(chǎn)堿／高層產(chǎn)酸，斜面產(chǎn)堿／高層產(chǎn)堿，質(zhì)量才算合格。
試劑、染色液和血清質(zhì)量控制

一、試劑
各種試劑配好后，均應(yīng)注明試劑名稱、配制日期、有效期及配制者，并作記錄，商品試劑亦應(yīng)注明購入日期及有效期。配制好的試劑均應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)菌株作性能測(cè)試，不合格者不能使用。性能測(cè)試間隔可根據(jù)試劑的穩(wěn)定性和使用頻率而定，如氧化酶試劑每天用前測(cè)試，靛基質(zhì)試劑每周測(cè)試1 次。試劑須根據(jù)不同要求作適當(dāng)?shù)馁A存，如氧化酶試劑應(yīng)置棕色瓶中4 ℃冰箱保存。

二、染色液
常用染色液如革蘭染色液在每次配制后并常規(guī)至少每周檢測(cè)1次，用標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌（ATCC25923）和大腸埃希菌（ATCC 25922）作陽性和陰性檢測(cè)。不常用染色液（如鞭毛染色液）應(yīng)于每次使用前，用已知特征的菌株作檢測(cè)。
3.診斷血清
診斷血清的使用和保存必須按說明要求執(zhí)行，一般置4℃冰箱貯存，且不得暴露室溫過久；使用前應(yīng)注意有效期及效價(jià)，第一次使用抗血清時(shí)應(yīng)用相應(yīng)的菌株檢查其有效性，以后每月檢測(cè)1次。如抗血清出現(xiàn)任何顏色的改變或混濁，即不能使用。

微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)標(biāo)本及檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量控制
一、微生物檢驗(yàn)標(biāo)本質(zhì)量控制
正確采集和處理標(biāo)本是實(shí)驗(yàn)室檢查獲得正確結(jié)果的前提，目前仍有不少實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)人員對(duì)檢驗(yàn)標(biāo)本分析前質(zhì)量控制的重視不夠。對(duì)標(biāo)本采集方法和時(shí)間、標(biāo)本來源，實(shí)驗(yàn)室人員雖然不能直接控制，但有責(zé)任人員正確采集標(biāo)本，可采取集中講課、個(gè)別輔導(dǎo)作取標(biāo)本示教等方式給予指導(dǎo)。同時(shí)控制影響檢驗(yàn)質(zhì)量的其他因素，如檢驗(yàn)標(biāo)本的運(yùn)送、儲(chǔ)存和處理等，均應(yīng)統(tǒng)一按正確的操作規(guī)程執(zhí)行。